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【MEK-020】職女。 File23</a>2011-05-20プレステージ&$マエカブ123分钟 CHX归并MG132检测卵白质褂讪性的体式
2024-08-24 04:56    点击次数:62

【MEK-020】職女。 File23</a>2011-05-20プレステージ&$マエカブ123分钟 CHX归并MG132检测卵白质褂讪性的体式

CHX是灰链霉菌的产品【MEK-020】職女。 File232011-05-20プレステージ&$マエカブ123分钟,频频用于检测卵白质或酶的半衰期。CHX扼制细胞总卵白合成的旨趣是阻断真核细胞核糖体易位流程。用相宜浓度的CHX惩办细胞(频繁为100μg/mL)不同技术点,收罗细胞样品进行WB践诺检测卵白质品貌。

半衰期短的卵白质会跟着时辰的推移赶快降解,而半衰期长的卵白质跟着时辰的推移,降解的很少。

CHX常用于检测卵白质的褂讪性和半衰期。鄙人面这个案例中,用50μg/mL的CHX惩办6h和12h,WB检测卵白抒发,发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。

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敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解(Ying Miao et al. 2023. bio protocol)

还不知说念检测卵白质褂讪性和半衰期体式的家东说念主不错先望望往期著作:《卵白质褂讪性、半衰期践诺的旨趣、体式和诈欺》

MG132又称苄氧羰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸,是一种多肽醛。MG132是全球熟知的卵白酶体扼制剂,MG132的作用机制是通过与卵白酶体20S催化中枢的活性位点苏氨酸残基中的羟基半缩醛响应,从而扼制卵白酶体活性。

鄙人面这个案例中,使用MG132梗概扼制卵白质的泛素化降解,促进泛素化卵白的积贮,从而更容易检测到卵白质的泛素化。如下图的图C所示:在不添加MG132时,即使Bmi-1和Ezh2能被泛素化,也可能会赶快降解,从而检测不到信号,MG132惩办扼制卵白酶体,导致泛素化的卵白积贮,因此更容易检测到泛素化的卵白。

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需要极端注重的是,如下图A和B所示,在不添加MG132时,可能检测不到ub信号。

需要泛素化质粒的不错关连小编。

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MG132促进卵白质泛素化(Sivaprakasam B et al. 2012. J Biol Chem)

另外,CHX和MG132也梗概归并起来考据卵白质的褂讪性和降解阶梯。举例鄙人面这个案例中,左边是MG132和CHX集会惩办,右边是只用CHX惩办,w/o MG132暗示 without MG132。讲明MG132增多了a-SMN卵白的褂讪性,而MG132莫得增多FL-SMN的卵白褂讪性。

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MG132对a-SMN和FL-SMN卵白半衰期的影响(Denise Locatelli et al. 2015. PLOS ONE)

全球不错左证我方的践诺场地生动选拔扼制剂单独惩办或集会惩办【MEK-020】職女。 File232011-05-20プレステージ&$マエカブ123分钟,从而更成心于发现问题所在,更好的分析效果。

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